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1、革蘭染色檢查分泌物及鏡檢：從潰瘍或橫痃處取材涂片作革蘭染色，鏡下可見到革蘭陰性短桿菌，呈長(zhǎng)鏈狀排列，多條鏈平行，似魚群狀，可考慮為杜克雷嗜血桿菌。
2、生化試驗(yàn)：氧化酶試驗(yàn)弱陽(yáng)性、過(guò)氧化酶試驗(yàn)陰性、非卟啉試驗(yàn)陰性、硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性、堿性磷酸酶試驗(yàn)陽(yáng)性。細(xì)菌生化試驗(yàn)的目的是為了檢測(cè)某種細(xì)菌能否利用某種物質(zhì)及其對(duì)某種物質(zhì)的代謝及確定細(xì)菌合成和分解代謝產(chǎn)物的特異性，借此來(lái)鑒定細(xì)菌的種類。
3、真菌培養(yǎng)法：標(biāo)本在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)可出現(xiàn)典型菌落，取典型菌落作細(xì)菌涂片可見到革蘭陰性短鏈桿菌，細(xì)菌經(jīng)分離鑒定可明確為杜克雷嗜血桿菌。
4、涂片鏡檢：從軟下疳開放性潰瘍處取材涂片染色，半數(shù)病例可查見末端鈍圓兩極染色的短小G-桿菌，呈魚群狀，為特征診斷標(biāo)志。
5、細(xì)菌培養(yǎng)：從病灶中或培養(yǎng)菌落中取材檢查，可見兩個(gè)以上細(xì)菌連成鎖狀，猶如魚群在游動(dòng)。檢出杜克雷嗜血桿菌不僅有助于診斷，而且可確定分離的細(xì)菌對(duì)抗生素的敏感性。
6、杜克雷嗜血桿菌抗體：IgM抗體敏感性為75%，特異性為85%，該抗體具有早期診斷價(jià)值；IgG抗體敏感性為95%，特異性為65%。
7、淋巴腺組織病理切片：在淋巴腺組織切片中可見典型的連成鎖狀的杜克雷嗜血桿菌。