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支原體感染一般2-3周可以被檢查出來，支原體的潛伏期較長，一般潛伏2-3周，發(fā)病前2-3天直至病愈數(shù)周均可在呼吸道分泌物中發(fā)現(xiàn)支原體。起病后兩周，約2/3的病人冷凝集試驗(yàn)陽性，滴定效價(jià)＞1:32，鏈球菌MG凝集試驗(yàn)效價(jià)≥1：40，連續(xù)兩次四倍上增高有診斷的價(jià)值。特別是當(dāng)?shù)味戎饾u升高時(shí)，有診斷價(jià)值。
支原體感染的診斷還包括血常規(guī)檢查、病原學(xué)檢查、PCR檢查。血常規(guī)檢查可見白細(xì)胞總數(shù)正?；蛏栽龆?，以中性粒細(xì)胞為主。病原學(xué)檢查通過留取痰、鼻和咽拭子、宮頸口、尿液等處的標(biāo)本，將標(biāo)本送細(xì)菌培養(yǎng)，培養(yǎng)分離出支原體對診斷具有決定性的意義。普通PCR技術(shù)檢測支原體特異性DNA具有快速、簡便、特異的優(yōu)點(diǎn)，敏感性高于細(xì)胞分離技術(shù)，用套式PCR檢測可顯著提高其敏感性。