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　　在臨床上，通常由腹部或大腿吸脂獲取脂肪組織后，經(jīng)離心、消化和洗滌等步驟獲得SVF，其中包含ADSC。然后，將其與脂肪組織按一定比例混合并移植至受區(qū)。也可以將SVF進(jìn)行體外培養(yǎng)，得到貼壁生長的ADSC，取體外生長狀態(tài)良好的ADSC與脂肪組織復(fù)合移植。由于CAL技術(shù)操作規(guī)范，易于自動(dòng)化生產(chǎn)，因此目前已有產(chǎn)業(yè)化設(shè)備上市，使該項(xiàng)技術(shù)的推廣與應(yīng)用更為便利。
　　一、應(yīng)用SVF的CAL技術(shù)
　?。ㄒ唬┲境槲?br/>　　研究發(fā)現(xiàn)，人類的腹部和大腿皮下脂肪中的ADSC最為豐富。因此，CAL技術(shù)常選取以上兩個(gè)部位為脂肪供區(qū)的最佳選擇。在無菌手術(shù)室內(nèi)，利用腫脹溶液對(duì)脂肪抽吸部位行組織腫脹麻醉處理后，通過直徑2.5～3mm的吸管以常規(guī)方法抽吸脂肪。經(jīng)負(fù)壓吸脂管吸出的混合物包含腫脹液成分、脂肪組織、結(jié)締組織、血細(xì)胞以及其他組織碎片等。
　?。ǘ㏒VF制備
　　將抽吸脂肪分為兩部分，其中一部分用于提取SVF，隨后將提取的SVF與另一部分脂肪混合，混合物用于移植。因此，提取含有ADSC的SVF過程是CAL技術(shù)的關(guān)鍵性步驟。整個(gè)分離過程一般需要70～80min，基本過程如下。
　　1、離心
　　將抽吸獲得脂肪的一半離心，通過離心的方法可使脂肪細(xì)胞、油脂和血細(xì)胞等成分分開。離心后，其混合液可分為上、中、下三層：
　　上層，主要為油脂，其中含有三酰甘油和乳糜顆粒，這是脂肪細(xì)胞破碎后的產(chǎn)物；
　　中間層，主要為純化的脂肪；
　　下層，含有血細(xì)胞、血漿、濾液等。此時(shí)中間層即為純化的脂肪組織。脂肪組織的一部分保存?zhèn)溆茫硪徊糠秩〕?，繼續(xù)以下步驟提出SVF。
　　2、消化
　　脂肪部分用等量的0.075％無菌膠原酶振蕩消化（37℃，30min）。
　　3、洗滌
　　以磷酸鹽緩沖液（phosphatebuffersaline，PBS）或生理鹽水液反復(fù)洗滌后再離心，分離成脂肪部分和液體部分。棄去脂肪部分，保留液體部分。
　　4、再洗滌
　　以PBS或生理鹽水液洗滌，離心。經(jīng)過離心獲得的底層有形細(xì)胞部分即為SVF，也就是富含ADSC的細(xì)胞混合物，除ADSC外，還有血液來源細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等。
　?。ㄈ┲窘M織-SVF復(fù)合物形成
　　將另一半抽吸所得的脂肪與處理得到的SVF混合，靜置15min，使ADSC充分吸附于脂肪上。這些脂肪類似于有活性的生物支架，作為移植物備用。分離的細(xì)胞需要經(jīng)過數(shù)量和質(zhì)量的嚴(yán)格檢測(cè)，也可以抽取小部分SVF進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)以驗(yàn)證細(xì)胞的活性。
　?。ㄋ模┲窘M織-SVF復(fù)合物移植
　　按常規(guī)脂肪移植方法進(jìn)行脂肪組織-SVF復(fù)合物移植。
　　二、應(yīng)用ADSC的CAL技術(shù)
　?。?）同上步驟完成脂肪抽吸、SVF制備。
　?。?）ADSC培養(yǎng)：將混合液接種于培養(yǎng)容器中，以細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，一般采用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液。每2～3d換液1次。SVF中所含的較多的血細(xì)胞成分因不能貼壁生長，通過換液可以去除。貼壁細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)。待細(xì)胞生長到一定數(shù)量后制成懸液，再與抽吸的脂肪組織混合后進(jìn)行應(yīng)用。
　?。?）脂肪組織-ADSC復(fù)合物形成：重新抽吸脂肪組織，將細(xì)胞懸液與其混合，靜置15min，使ADSC充分吸附于脂肪上。
　?。?）脂肪組織-ADSC復(fù)合物移植：按脂肪移植常規(guī)方法進(jìn)行脂肪組織-SVF復(fù)合物移植。